PI染色试剂盒,也称为死细胞红色荧光染色试剂盒(PI),是一种快速、高效、便捷的基于碘化丙啶特异性地对死细胞核进行染色的试剂盒。本试剂盒搭配核糖核酸酶(RNase)还可用于细胞周期分析。
碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)是一种常用的细胞核荧光染料,作为一种溴化乙锭(EB)的类似物,能够嵌入碱基 对之间实现与双链DNA结合。PI经488 nm荧光激发,产生相对较大的斯托克司频移后,并在617 nm处具有最大发射波长。 另外,PI不能穿透细胞膜而被排斥在活细胞外,但是可以穿过破损的细胞膜而对核染色。利用以上特性,PI可作为细胞活力分析的荧光探针之一。不仅可单独使用;也可以同Calcein-AM、Hoechst 33258或 Hoechst 33342等活细胞荧光探针一起使用,同时对活细胞和死细胞染色和鉴定。也能够与488 nm激发的荧光素如FITC和PE等联合使用。
除用于坏死细胞的染色外,本试剂盒还可以用于细胞周期分析。由于PI结合DNA的同时也可以结合RNA,所以需要使用核糖核酸酶 (RNase)先充分降解RNA,使PI仅对细胞核中的DNA染色,从而用于细胞核的染色或使用流式细胞仪对细胞进行 DNA含量测定,然后根据DNA含量的分布情况,进行细胞周期分析。
本试剂盒内提供的PI纯度高,溶解在超纯水中,浓度为1mg/mL(1.5mM)。PI的常用终浓度为1-50μg/mL,通常10μg/mL染色孵育 时间为5-30分钟即可得到较好的效果。为得到比较理想的结果,请根据细胞类型和实验实际情况对PI的最终浓度、染色时间进行 适当调整。本试剂盒中提供的Assay Buffer可在一段时间内维持细胞的正常状态,并给细胞提供一定的营养。
按PI最终工作浓度为10μg/mL计算,本试剂盒每毫升PI (1mg/mL)可以配制100mL的染色工作液,以96孔板为例,每孔检测体系的 体积为100μL时可以检测1000次;如果用于流式细胞仪检测,体系体积为0.5mL时可以检测200次;对于6孔板中的贴壁培养细胞样品,检测体系体积为1mL时可以检测100次。
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