一、10× TBST 概述
10× TBST(Tris-Buffered Saline with Tween-20)是一种常用于 Western blot、ELISA 和免疫组织化学(IHC)等实验的洗涤缓冲液。它主要用于去除非特异性结合的抗体或蛋白,提高实验信号的特异性,同时维持稳定的 pH 环境。
二、大致配方(pH 7.4):
Tris-HCl(200 mM):维持缓冲体系的 pH 稳定。
NaCl(1.5 M):维持渗透压,提高蛋白稳定性。
Tween-20(0.1% v/v):作为表面活性剂,减少蛋白的非特异性结合。
三、主要应用
Western blot:用于洗涤 PVDF 或硝酸纤维素膜,减少背景干扰,提高检测信号的特异性。
ELISA:在酶联免疫吸附实验中清洗微孔板,去除未结合的抗体或蛋白,提高灵敏度。
免疫组织化学(IHC):清洗组织切片,去除非特异性结合,提高染色效果。
蛋白印迹实验:在封闭和抗体孵育步骤后用于清洗,以降低背景噪声。
四、使用方法
稀释比例:使用前按 1:10 稀释,即取 100 mL 10× TBST 加 900 mL 去离子水,配制成 1× TBST 工作液。
长期存放需置于 2-8°C 冷藏,短期频繁使用可室温保存,避免污染。
若长时间不用,Tween-20 可能析出,若出现沉淀,使用前充分混匀或者室温恢复溶解。
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